Sådan udføres analysen ved hjælp af PCR: beskrivelse af proceduren

Pharyngitis

Polymerasekædereaktion har været kendt i 30 år. Det er almindeligt anvendt på mange områder, fra arkeologi til genetik.

Det er PCR-metoden, der hjælper med at etablere faderskab, men oftest bruges det til at identificere forskellige infektionssygdomme i menneskekroppen.

Hvordan udføres PCR-analyse, og hvad er det? Vi vil forsøge at besvare disse spørgsmål i detaljer.

PCR analyse - hvad er det?

Polymerasekædereaktion (PCR) er en højpræcisionsmetode for molekylærgenetisk diagnose, som gør det muligt at opdage forskellige infektiøse og arvelige sygdomme hos mennesker, både i de akutte og kroniske stadier, og længe før sygdommen kan manifestere sig.

PCR-metoden er helt specifik og udføres korrekt, kan ikke give et falsk positivt resultat. Det vil sige, hvis der ikke er nogen infektion, vil analysen aldrig vise, hvad den er. Derfor er det nu meget ofte til godkendelse af diagnosen, at der tages en ekstra PCR-analyse for at bestemme årsagsmidlet og dets natur.

Polymerasekædereaktion (PCR) i 1983, udviklet af Carey Mulllis (USA), for hvilken han i 1993 blev tildelt Nobelprisen i kemi.

Hvad er fordelen ved denne metode?

Diagnose ved denne metode gør det muligt for en at finde patogenet direkte i genet, der er indeholdt i de undersøgte materialer. Dette er den mest nøjagtige analyse af kønsinfektioner, skjulte infektioner, forskellige seksuelt overførte sygdomme.

Forskelle PCR-diagnostik fra andre metoder til laboratorieforskning er som følger:

  • Metoden er rettet mod at identificere selve patogenet;
  • PCR diagnose er universel: til påvisning af flere patogener;
  • sygdomme er kun en biologisk prøve af patienten tilstrækkelig;
  • Metoden er meget følsom og ledsages ikke af andre tværreaktioner.

Desuden er fordelene ved PCR-diagnostik, at ethvert biologisk materiale af patienten er egnet til analyse: blod, udledning fra kønsorganerne, urin, sæd.

Hvilke infektioner kan et smear på PCR afsløre?

Et stort antal patogener kan være til stede i kroppen, herunder "skjulte" dem, der ikke manifesterer sig i lang tid.

Smøreanalysen på PCR gør det muligt at afsløre sådanne infektioner:

Testmaterialet til PCR er sædvanligvis sputum, spyt, urin og blod. Før analysen skal du omhyggeligt forberede dig på det, efter at have fået en indledende konsultation med en læge.

Blod til PCR gives normalt på tom mave. Gode ​​resultater viser analyse, når materialet til undersøgelsen er taget fra livmoderhalskanalen eller urinrøret. I dette tilfælde er det bedst at udføre PCR-diagnostik senest en dag efter samleje.

Varianter af PCR

PCR bruges i mange områder til analyse og i videnskabelige forsøg. Der er forskellige analysemetoder:

  1. Reverse transkriptions-PCR (Reverse Transcription PCR, RT-PCR (engelsk)) anvendes til at amplificere, isolere eller identificere en kendt sekvens fra et RNA-bibliotek.
  2. Inverteret PCR (Inverse PCR (Eng.)) - anvendes, hvis kun en lille del er kendt inden for den ønskede sekvens. Denne metode er især nyttig, når det er nødvendigt at bestemme tilstødende sekvenser efter DNA-insertion i genomet.
  3. Nested PCR (Nested PCR) anvendes til at reducere antallet af reaktionsbiprodukter. To par af primere anvendes og to på hinanden følgende reaktioner udføres.
  4. Asymmetrisk PCR (asymmetrisk PCR) udføres, når det er nødvendigt at amplificere hovedsageligt en af ​​kæderne i det oprindelige DNA. Anvendes i nogle sekventerings- og hybridiseringsassays.
  5. Kvantitativ PCR (kvantitativ PCR, Q-PCR (Eng.)) Eller realtids-PCR bruges til direkte at overvåge måling af mængden af ​​et specifikt PCR-produkt i hver reaktionscyklus.
  6. Trin PCR (Touchdown PCR (Eng.)) - ved hjælp af denne fremgangsmåde reduceres effekten af ​​uspecifik binding af primere.
  7. Gruppespecifik PCR (gruppespecifik PCR) - PCR for beslægtede sekvenser inden for en eller mellem forskellige arter ved anvendelse af konservative primere til disse sekvenser.

Hvis nukleotidsekvensen af ​​matrixen er delvist eller ukendt, er det muligt at anvende degenererede primere, hvis sekvens indeholder degenererede positioner, hvori eventuelle baser kan lokaliseres. For eksempel kan primer-sekvensen være:... ATH..., hvor H er A, T eller C.

Hvilke biologiske materialer undersøges?

Materialet til PCR-undersøgelser, hvor udenlandsk bakterielt DNA kan detekteres eller virusets DNA eller RNA, kan bestå af forskellige biologiske medier og humane væsker:

  1. Urin. Det kan bruges til infektion i urogenitalt tarmkanal hos mænd og urinorganer hos kvinder (hos mænd er brugen af ​​urin som et materiale erstatning for epitelskrabning).
  2. Opspyt. Det er vant til at diagnosticere tuberkulose og mindre almindeligt at diagnosticere respiratoriske former for chlamydia og mycoplasmosis. Sputum i en mængde på 15-20 ml opsamles i en steril (engangs) flaske.
  3. Biologiske væsker. Prostatajuice, pleural, cerebrospinal, fostervand, ledvæske, bronchoalveolær lavage, spyt er taget ifølge indikationer.
  4. Epithelialskrabninger fra slimhinder. Fælles for diagnosticering af seksuelt overførte sygdomme, såsom gonoré, klamydia, mycoplasmosis, ureaplasmose, trichomoniasis, gardnerellezis, herpetic og andre infektioner, der påvirker slimhinderne.
  5. Biopsier. De mest anvendte biopsier i maven og tolvfingertarmen for at identificere Helicobacter pylori infektion.
  6. Blod, plasma, serum. Anvendes til PCR analyse af hepatitis B, C, D, G virus, herpes, CMV, HIV, humane gener.

Hvordan forbereder man sig på analysen?

Pålideligheden af ​​PCR-resultatet er direkte afhængig af rigtigheden af ​​levering af materiale til undersøgelse. Materialet bør ikke være forurenet, ellers vil resultatet af undersøgelsen ikke være objektivt. De vigtigste anbefalinger inden indgivelse af en PCR-analyse er følgende krav:

  1. Urin leveres om morgenen i en steril beholder.
  2. En blodprøve for infektion skal tages på en tom mave om morgenen.
  3. Det er ikke nødvendigt at vise seksuel aktivitet dagen før analysen.

Resultatet af analysen vil være klar i 1,5-2 dage efter proceduren. Der er sådanne situationer, når resultatet kan udarbejdes samme dag.

Afkodning af analysen af ​​CRP

Processen med fortolkning af den præsenterede forskning skelnes af dens enkelhed. Resultaterne af PCR-analysen kan opnås i 1,5-2x dage efter levering af materialet. I nogle tilfælde er resultatet klar på den allerførste dag, og det er det, de kan betyde:

  • Et negativt resultat indikerer, at det infektiøse middel mangler i det diagnosticerede materiale.
  • Pcr-positiv betyder, at patogenet DNA eller RNA er til stede i den menneskelige krop.

I nogle tilfælde producerer en kvantitativ bestemmelse af mikroorganismer. Dette gælder især for sygdomme forårsaget af opportunistiske mikroorganismer. Da disse bakterier viser deres negative påvirkning kun med overskydende mængder.

Også kvantitativ analyse af PCR er vigtig for valget af terapeutisk taktik og for at kontrollere behandlingen af ​​virale infektioner som HIV og hepatitis virus.

Hvor præcist er PCR diagnose af infektioner?

PCR-metoden er kendetegnet ved høj nøjagtighed, specificitet og følsomhed. Det betyder, at denne analyse er i stand til:

  • nøjagtigt bestemme tilstedeværelsen eller fraværet af infektion;
  • Angiv præcis, hvilken form for infektion (specificitet);
  • detekterer infektion selv med meget lavt DNA-indhold af mikrober i biologisk materiale,
  • som har været genstand for forskning (følsomhed).

PCR analyse: pris og tid

Prisen på en bestemt analyse afhænger af hvilken infektion du kontrolleres for. Omtrentlige priser og vilkår:

  1. STI: 300-500 rubler, tid - 1 dag;
  2. Epstein-Barr-virus, humant papillomavirus, herpesvirus, cytomegalovirus: 300-500 rubler, vilkår - 1 dag;
  3. Hepatitis A, B, C, D, G: kvalitativ analyse af 650 rubler, kvantitativ analyse af 2000 rubler. Vilkår - op til 5 dage
  4. Antistoffer til hepatitis C-viruset, total (Anti-HCV) - 420 rubler;
  5. Antistoffer mod hepatitis C-virus, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 rubler;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 rubler, vilkår - 1 dag;
  7. HIV (antistoffer og antigener) - 380 rubler;
  8. HIV RNA, kvalitativt - 3.500 rubler;
  9. HIV RNA, kvantitativt - 11.000 rubler.

For at spare penge kan du vælge en fast sats af analyser. Denne service leveres af de fleste klinikker, hvor det er muligt at bestå analysen ved hjælp af ERP-metoden (invitro, onclinics osv.).

PCR diagnose af tuberkulose

Tuberkulose er en specifik infektion, dets fokus kan være i humane væv i årevis og spredes derefter i flere måneder. Dette er en kronisk sygdom, hvis optimale behandlingsregimer er vanskelige at vælge. En af grundene til dette er den sene diagnose, når mykobakterier, mens de er i menneskekroppen, allerede har tilpasset sig mange stoffer.

Hvilke moderne diagnosemetoder eksisterer? PCR diagnostik - hvad er det? Hvordan foregår denne forskning? I hvilke tilfælde er tuberkulose diagnosticeret af denne metode og hvad er dens essens?

Hvad er PCR-diagnostik

Dette er en af ​​de mest moderne metoder til diagnosticering af ikke kun sygdomme, men også påvisning af biologisk materiale. PCR-diagnostik blev opfundet relativt nylig. For cirka 30 år siden i 1983 foreslog en amerikansk biokemi, Carey Banks Mullis, et komplekst opsvingskema for det biologiske materiale af mikroorganismer i et kort segment. Takket være sin opdagelse blev forskeren tildelt den højeste pris - Nobelprisen.

Hvad er det - PCR diagnose af infektioner? Polymerasekædereaktion (PCR) er en diagnose af påvisning af virussygdomme, baseret på genteknologiske metoder. Det er meget udbredt inden for medicinsk mikrobiologi, immunologi og virologi. Metoden er universel og hjælper med at lave en diagnose med en lille mængde materiale. En infektion kan registreres bogstaveligt i de første timer med infektion med det, længe før de første symptomer på sygdommen optræder.

Metoden består i at opnå fra materialet fra en syg person, ikke selve patogenet, men fragmenter af genomet (DNA-partikler), dets biosyntese med efterfølgende bestemmelse til hvilken klasse af mikroorganismer det opnåede genetiske materiale tilhører ved hjælp af molekylære genetiske metoder.

På trods af at dette er en kompleks proces, tager det meget mindre tid end mange biologiske metoder til at detektere smitsomme stoffer. Inden for få timer kan en mikroorganisme detekteres ved hjælp af PCR. For at gøre dette er der ingen grund til at isolere det fra miljøet (blod, cerebrospinalvæske, sputum) og vokse det i lang tid på kunstige næringsmedier. Det er nok, at et lille fragment af DNA-strengen af ​​det infektiøse middel er til stede i det undersøgte materiale.

Reaktionsgrundlaget er muligheden under kunstige betingelser (in vitro) til at skabe syntese af nukleinsyremolekyler af det infektiøse middel.

Hvad er der brug for PCR?

  1. Primers er de DNA-segmenter, hvorfra biosyntese eller skabelse begynder.
  2. Nukleotider eller komplekse forbindelser, der er grundlaget for et DNA eller RNA molekyle.
  3. Polymerasekædereaktion er umulig uden tilstedeværelse af polymerase, hvilket er et enzym, der accelererer PCR.

Trin af PCR-diagnostik

Hvordan udføres molekylær diagnose med PCR? Proceduren er enkel og tager kort tid under hensyntagen til indsamling af materiale.

  1. Inden studiet påbegyndes, tager de det nødvendige biologiske materiale - det her er det bronkiske vaskevand, blod, maveindhold, sputum. Den type biologisk materiale afhænger af det formodede patogen.
  2. Denaturering eller ødelæggelse af den primære struktur af DNA, som består af to kæder. Kernen i denne fase er at adskille de to kæder under påvirkning af høj temperatur (maksimum er 98 ºC, som ikke varer mere end to minutter).
  3. Ved næste fase af PCR, kaldet annealing, reduceres temperaturen med flere grader, således at primeren vil binde til DNA-strengen.
  4. Forlængelse, hvor syntesen af ​​de ønskede molekyler finder sted direkte.

Som følge heraf modtager kun 25-30 sådanne cyklusser det nødvendige antal kopier af mikroorganismer DNA, som er lette at genkende.

Kræver PCR diagnose af tuberkulose?

Det er ikke muligt for absolut alle mennesker med mistænkt tuberkulose at udføre PCR, da metoden kræver dyrt udstyr. Ikke alle offentlige klinikker har råd til at købe det. Derudover er det sket, at de sædvanlige metoder til diagnosticering af en infektion i de fleste tilfælde også retfærdiggør sig selv.

Disse omfatter:

  • patientundersøgelse, historieoptagelse;
  • fuld undersøgelse af personen
  • en undersøgelse ved hjælp af Mantoux tuberculin testen;
  • radiografi eller fluorografi;
  • computerdiagnostik om nødvendigt;
  • mikrobiologiske forskningsmetoder: smear mikroskopi og sputum bakteriologisk undersøgelse.

PCR til tuberkulose udføres i særlige tilfælde, når det er svært at foretage en diagnose, eller det er ikke muligt at udføre andre instrumentelle metoder.

På trods af overflod af diagnostiske metoder fortsætter forekomsten af ​​tuberkulose at vokse. I øjeblikket er der ikke kun vækst, men også andre funktioner:

  • sygdommen opstår ofte i svær form;
  • Antallet af dødelige tilfælde øges;
  • mere modstandsdygtig over for moderne kemoterapi er diagnosticerede former for sygdommen.

Folks tilbageholdenhed med at gennemgå rutinemæssige medicinske undersøgelser årligt fører afvisningen af ​​vaccination til spredning af tuberkulose. Under sådanne forhold har vi brug for hurtige, informative og effektive forskningsmetoder, som bør være tilgængelige for børn og voksne. Alle ovennævnte diagnostiske metoder er meget ringere end PCR.

Fordele ved diagnosticering af tuberkulose med PCR

Denne forskning, men ny, har vist sig godt, især i kontroversielle tilfælde, hvor det er umuligt at foretage en diagnose af en række årsager.

Takket være PCR er det meget lettere at opdage det forårsagende middel af tuberkulose i testmaterialet.

Fordelene ved PCR-diagnostik er som følger.

  1. Dette er en hurtig analyse. Et lille fragment af DNA-molekylet kan bruges til at diagnosticere om få timer (ca. fem), som med succes anvendes i nødsituationer, når for eksempel før en operation er det nødvendigt at afgøre, om en person er syg med tuberkulose.
  2. PCR-analyse er tilladt i tilfælde af, at andre metoder ikke er tilgængelige eller forbudt (til påvisning af lungetuberkulose, nogle gange må du tage flere radiografiske billeder, hvilket vil være en stor dosis stråling).
  3. Ved hjælp af PCR undersøges ethvert biologisk miljø for tilstedeværelsen af ​​et patogen i det. For eksempel kan du gennemføre en undersøgelse af cerebrospinalvæske, hvis der er en mistanke om tuberkuløs meningitis.
  4. Tilladt PCR-diagnose af smitsomme sygdomme hos børn, fordi metoden er sikker.
  5. Tillader dig at identificere patogenet på ethvert stadium af sygdommen.
  6. PCR's høje følsomhed gør det muligt at opdage Mycobacterium tuberculosis, selvom der kun er få mikroorganismer i det biologiske materiale.
  7. Det er godt at udføre for diagnosticering af sygdomsfornyelse.

Efter alt det læsede PCR virker næsten perfekt diagnostisk metode, som skal gøre alle mistænkt for tuberkulose. Men der er også ulemper her, de skal tages i betragtning.

Ulemper ved PCR ved diagnosen tuberkulose

I vores tid er sådan diagnostik mere sjælden end regelmæssighed. Og for dette er der grund.

  1. Dette er en dyr forskningsmetode. På mange klinikker er udstyr til PCR fraværende på grund af dets høje omkostninger, men analysen kan stadig gøres i betalte laboratorier.
  2. Umiddelbart efter behandling kan døde mykobakterier eller lever i små mængder stadig være til stede i kroppen (resultatet vil være positivt under PCR-diagnostik), så metoden vil være upålidelig på nuværende tidspunkt, det giver ingen mening at udføre det.
  3. Mutationer af mykobakterier resulterer i ineffektiv PCR - en normal DNA-streng-sekvens kan ikke syntetiseres.
  4. Det er nødvendigt at vælge det rigtige miljø for undersøgelsen. Blod er kun taget, hvis det mistænkes for at blive inficeret (sepsis). Der er ikke behov for at tage sputum, hvis der er et spørgsmål om tuberkulose i nervesystemets organer. I dette tilfælde vil PCR ikke være i stand til at detektere patogenet, og diagnosen vil være uninformativ.

Indikationer for at detektere tuberkulose ved hjælp af PCR-analyse

PCR-diagnose af tuberkulose udføres oftest i kontroversielle tilfælde. Hvornår refererer læger denne undersøgelse?

  1. Hvis det er svært at foretage en diagnose ved hjælp af de sædvanlige tilgængelige metoder, men der var kontakt med en patient med tuberkulose.
  2. I det tilfælde, hvor en person ikke kan leveres til en klinik for at gennemføre rutinemæssige rutinemæssige test for tuberkulose, er det lettere at undersøge ham ved anvendelse af PCR, da sputum til testen kan leveres i en krukke, og diagnosen er bekræftet inden for få timer.
  3. Hvis en person skal have en nødoperation, og det er presserende at finde ud af om han er syg med tuberkulose.
  4. Om nødvendigt er en gravid kvinde også bedre at undersøge for tuberkulose ved anvendelse af PCR, da metoden er sikker.
  5. På en betalt basis er enhver, der ikke er blevet diagnosticeret med tuberkulose, blevet bekræftet ved hjælp af bakteriologiske metoder og fluoroskopi. Dette sker, når læsionen i lungerne er umærkelig i det direkte billede, og personen under levering af sputum til undersøgelsen kunne ikke følge anbefalingerne for korrekt samling af materiale. I dette tilfælde er personen bekymret for alle symptomer, der er karakteristiske for lungetuberkulose.
  6. Når der er tvivl om resultaterne af Mantoux-testen.
  7. Det er bedre at gøre PCR-diagnose af tuberkulose hos børn. Fremgangsmåden er sikker, skaber ikke yderligere strålingseksponering og er effektiv til at detektere vanskeligt at diagnosticere sygdomsformer.

Tidlig diagnose af tuberkulose er nøglen til ordentligt ordineret behandling og nedsættelse af sygdommens spredning. Ofte er velkendte sygdomsdetekteringsmetoder ikke altid effektive. Derfor er PCR i dag en af ​​de mest pålidelige og sikre måder at påvise infektion i de tidlige stadier af dens udvikling.

PCR-analyse

PCR (polymerasekædereaktion) er langt den hurtigste og mest pålidelige metode til diagnosticering af infektionssygdomme.

Princippet om polymerasekædereaktionsmetoden blev udviklet af Kary Mullis i 1983. Til sin opdagelse modtog K. Mullis i 1993 Nobelprisen i kemi.

PCR-metoden gør det muligt at opnå en signifikant stigning i små koncentrationer af visse nukleinsyrefragmenter (DNA) i det biologiske materiale (prøve). Metoden er baseret på multipel selektiv kopiering (amplifikation) af en bestemt sektion af DNA ved anvendelse af enzymer under kunstige betingelser.

Fordelene ved PCR-diagnostikmetoden som en diagnostisk metode til infektionssygdomme

Direkte påvisning af patogener

Mange traditionelle diagnostiske metoder, såsom enzymimmunoassay, detekterer proteinmarkører, der er produkter af vital aktivitet af smitsomme stoffer, hvilket kun giver indirekte tegn på forekomsten af ​​infektion. Identifikation af et specifikt DNA-område af et patogen ved PCR-metoden giver en direkte indikation af tilstedeværelsen af ​​patogenet.

Høj specificitet

Den høje specificitet af PCR-metoden skyldes det faktum, at et unikt DNA-fragment er påvist i det undersøgte materiale. Specificiteten bestemmes af primers nukleotidsekvens, som udelukker muligheden for at opnå falske resultater i modsætning til immunologiske analysemetoder, hvor fejl i forbindelse med krydsreagerende antigener er hyppige.

Høj følsomhed

PCR-metoden gør det muligt at opdage enslige celler af bakterier eller vira. PCR-analyse afslører tilstedeværelsen af ​​patogener af infektionssygdomme i tilfælde, hvor andre metoder (immunologiske, bakteriologiske, mikroskopiske) ikke kan gøre dette. Sensibiliteten af ​​PCR-analysen er 10-100 celler pr. Prøve (følsomheden af ​​immunologiske og mikroskopiske test er 103-105 celler).

Universalitet af proceduren for påvisning af forskellige patogener

Materialet til undersøgelsen ved PCR er patogenens DNA. Metoden er baseret på påvisning af et DNA-fragment eller RNA, som er specifikt for en bestemt organisme. Ligheden af ​​den kemiske sammensætning af alle nukleinsyrer muliggør anvendelse af ensartede metoder til laboratorieforskning. Dette gør det muligt at diagnosticere flere patogener fra et enkelt bioassay.

Høj analysehastighed

Til PCR-analyse er isolering og dyrkning af patogenens kultur ikke nødvendig, hvilket kræver meget tid. Den samlede metode til behandling af biomaterialet og påvisning af reaktionsprodukter og automatisering af amplifikationsprocessen gør det muligt at gennemføre en komplet analyse i 4-5 timer.

Evnen til at diagnosticere ikke kun akutte men også latente infektioner

PCR-metoden er særlig effektiv til diagnosticering af vanskelige at dyrke, uudviklede og vedvarende former for mikroorganismer, som ofte opstår i latente og kroniske infektioner, da denne metode undgår de vanskeligheder, der er forbundet med at dyrke sådanne mikroorganismer i laboratoriet. Anvendelsen af ​​PCR-diagnostik er også meget effektiv mod patogener med høj antigenvariation og intracellulære parasitter.

Hvor effektiv er sputumprøve for tuberkulose ved hjælp af PCR?

For at identificere Koch-pinde hos mennesker anvendes forskellige diagnostiske metoder. Takket være ham kan patologien detekteres selv i begyndelsen, hvilket øger patientens chancer for genopretning. Sputumanalyse for tuberkulose er en teknik, der er mest værdsat og er ret effektiv. Hvad er det, og hvor meget koster en sådan analyse?

Hvad er analysen af ​​sputum med PCR?

PCR står for polymerasekædereaktion. Denne metode er effektiv mod infektionssygdomme. For at etablere en klar diagnose behøver du ikke at samle en stor mængde biomateriale og vente længe, ​​som i tilfælde af sputumsåning.

Fremgangsmåden er baseret på opnåelse af DNA af mikroorganismepartikler. Endvidere vil molekylærgenetisk forskning bestemme, hvilken type mikroorganismer der skal indeholde det tilgængelige materiale. Under testrørsforhold syntetiserer en specialist bakteriemolekyler og træffer de relevante konklusioner om nogle få timer.

effektivitet

Sputumanalyse for Mycobacterium tuberculosis er effektiv, når Kochs snor har ramt åndedrætssystemet. I dette tilfælde kan sygdommen let identificeres, selv i de første timer med infektion.

Men sputumanalyse vil ikke vise et pålideligt resultat, hvis tuberkulose er til stede:

  • knogler;
  • hjerne, rygmarv
  • nervesystem
  • ledd osv.

Fysiater vil kunne bestemme sygdommens art under hensyntagen til de nuværende symptomer og basere sig på resultaterne af generelle og andre analyser.

Det er også uhensigtsmæssigt for en sådan metode til forskning i tilfælde, hvor du skal foretage en kontrolanalyse efter terapeutisk behandling af sygdommen. Resultatet vil være positivt, som i kroppen, under alle omstændigheder er der stadig levende eller død IBC. Det er bedre at give præference til en anden diagnostisk procedure.

Kontraindikationer til metoden

Som sådan er der ingen kontraindikationer for sputumprøvning for tuberkulose under anvendelse af PCR. Der er begrænsninger. Som nævnt ovenfor er der ikke behov for at gennemføre det efter behandling af tuberkulose. Resultaterne vil ikke være nyttige. Her er det ønskeligt at ty til en anden diagnose.

Derudover er der ingen andre hindringer for denne diagnose. Sputum kan undersøges i enhver aldersgruppe og for eventuelle tilknyttede sygdomme. Selv om der ikke er rigelig frigivelse af sputum, kan analysen udføres ved at tage slim ved brug af bronkoskopi.

fordele

I denne metode omfatter massen af ​​plusser disse:

  1. Høj specificitet og følsomhed. Kun den forårsagende middel til tuberkulose detekteres. Der kan ikke være noget falsk svar, hvis alle nyheder i proceduren tages i betragtning. Mykobakterier opdages selv når deres mindste antal. Selv hvis der er 10 unormale celler i det indsamlede materiale, vil infektionen blive detekteret.
  2. Hastigheden for at få et svar. Hvor meget analyse er gjort? Efter 3-5 timer kan du få resultatet. Der er ikke behov for at lave sputumkultur for tuberkulose, og det reducerer tiden.
  3. Du kan identificere som en skjult infektion, og den der er i akut form.
  4. Der er ingen absolutte kontraindikationer. Dette gør det muligt at gennemføre proceduren for alle uden undtagelse (selv for små børn), og især når andre metoder ikke er løst.
  5. Ved hjælp af PCR-diagnostik studeres forskellige biomaterialer (urin, afføring, blod, spyt, cerebrospinalvæske osv.).
  6. Metoden afslører tuberkulose i de tidlige stadier, i de første timer efter infektion.
til indhold ↑

mangler

Udover de positive sider er der også negative. Dette er:

  1. PCR-analyse er en dyr "fornøjelse". Desuden er det udstyr, der er nødvendigt for dets gennemførelse, ikke tilgængeligt i alle lægecentre. I klinikker er det sjældent til stede, da dets værdi også er stor. Hvis vi taler om private klinikker, så ja, du kan finde denne slags diagnose. Tillad selv, desværre kan ikke alle.
  2. Det viser et falsk positivt resultat hos de mennesker, der for nylig har gennemgået en behandling med tuberkulose.
  3. Hvis MBC er muteret, kan metoden også give falske resultater.
  4. Hvis materialet opsamles forkert, eller den specialist, der udfører undersøgelsen, har utilstrækkeligt kvalifikationsniveau, så er en fejl også mulig. I nogle tilfælde skal proceduren gentages flere gange, og hver gang betalingen gentages.
til indhold ↑

Forberedelse til analyse

For at materialet skal være af høj kvalitet, skal det samles korrekt og være forberedt på det korrekt.

Der er visse regler for indsamling af sputum til tuberkulose. Handlingsalgoritmen er som følger:

  1. Selv om aftenen, om aftenen har en person brug for at drikke en ekspektorant (hvis sputum flytter væk dårligt). Selv om det ikke hjalp, skal indånding udføres på grundlag af et lægemiddelfortyndende og sprængstof. I fravær af sputum er patienten målrettet mod bronchoskopi. Det er under denne procedure, at materialet til undersøgelsen er taget.
  2. Køb en speciel container på forhånd. Det er sterilt og lufttæt, så intet ekstra kan placeres der, såvel som åbnet på forhånd.
  3. Værelset, hvor sputumet skal opsamles, skal være godt ventileret. Det er nødvendigt at åbne vinduer, døre, tænde hooden. En anden god mulighed er at få frisk luft (for eksempel til balkonen eller til gården).
  4. Umiddelbart før proceduren skal du advare alle, så ingen kommer ind i lokalet, hvor alting vil ske. Der bør ikke være ekstra mikropartikler i biomaterialet - dette er vigtigt.
  5. Spise før du vælger, anbefales ikke.
  6. Mund og hals skylles.
  7. Spyt er spyttet ud. Dens kapacitet bør falde minimum.
  8. Ved hoste tager en person slimmen ud og spytter den i en forberedt beholder. Efter proceduren lukkes låget tæt og tager prøven til laboratoriet.

Hvordan man samler sputum skal fortælle lægen. Hvis patienten ikke tør at gøre det alene, så kommer sundhedsarbejdere til undsætning. Under manipulationen lægger de på en speciel beskyttelsesmaske. Samle sputum vil være i et specielt rum, hvor der ikke er nogen måde for fremmede. Hvis patienten ikke kan komme til klinikken, kommer specialisten til sit hus og hjælper med at indsamle slim.

Hvis bronchoskopi er udført, injiceres patienten i luftrøret med en enhed - et bronchoskop. Det er med hans hjælp at materialet er taget.

For pålidelighed er det tilrådeligt at bestå analysen tre gange, nemlig:

  • om morgenen på tom mave
  • efter første gang efter 4-5 timer;
  • 24 timer efter den første undersøgelse og også før måltider.
til indhold ↑

Hvordan er denne analyse gjort?

At passere en sputumtest for tuberkulose er kun en del af jobbet. Hoved foran. Meget afhænger af, hvordan man forberedte en specialist.

Studiens forløb er som følger:

  1. Specialisten fortsætter med ødelæggelsen af ​​den primære struktur af DNA (denaturering). Der er to kæder her. Ved høje temperaturer adskilles de.
  2. Ved næste trin reduceres temperaturen (annealed). Dette er nødvendigt for forbindelsen af ​​DNA-strengen med primeren.
  3. Den tredje fase er forlængelse. Her syntetiseres de nødvendige molekyler.
til indhold ↑

Afkodningsresultater

Mycobacterium tuberculosis i sputum ved PCR kan detekteres eller ej. Et positivt resultat er baseret på det faktum, at Koch stikker DNA i biomaterialet. Dette tyder på, at personen er smittet. Med en negativ - 98% af det faktum, at emnet ikke er inficeret.

Indikatorer kan bedømmes på:

  • hvilken fase af patologi (latent eller aktiv);
  • hvor meget kroppen påvirkes
  • om den valgte behandling er effektiv i en bestemt sag.

Husk at intet er grundigt. Derfor kan der være et falsk-positivt eller falsk-negativt resultat. For at sikre dets rigtighed anbefales andre diagnostiske procedurer, eller PCR udføres to gange (tre gange).

Omkostningsanalyse i forskellige centre

Du kan give sputum til PCR i forskellige klinikker. Lad os give eksempler på flere populære Moskva-centre med prispolitik.

Metoder til test af sputum for tuberkulose

Sputumanalyse for tuberkulose indgår i det sæt diagnostiske foranstaltninger, der er nødvendige for at identificere og afklare diagnosen. Sputumindhold hjælper med at gøre et kompetent behandlingsregime.

Hvordan bestå en sputum test for tuberkulose

Læger har udviklet regler for at tage analysen. Spyt opsamles om morgenen, før personen har spist morgenmad. For det første udfører patienten hygiejneprocedurer:

  • tandemaljen rengøring;
  • grundig skylning med rent vand i mundhulen og svælget.

Så begynder den øjeblikkelige levering af materiale til analyse. Hvordan bestå en sputum test? Krav til proceduren:

  1. Forberedelsen begynder på forhånd om aftenen. Patienten opfordres til at tage specielle lægemidler, der vil gøre lungsekretionen mere naturlig. Disse er ekspektorative og tyndere forbindelser. Hvis sådanne procedurer ikke hjælper, udføres indånding med en farmaceutisk sammensætning til ekspektorering.
  2. Forbered beholdere til sputum. Slim opsamles i steriliserede retter, lukker tæt, tæt.
  3. Før levering, hoste op og spytte i en beholder. Mængden af ​​spyt bør ikke være stor, det kræver sputum fra strubehovedet. Bakterier i mundhulen er udenfor i analysen.
  4. Saml spyt i et rum med fremragende ventilation. Analysen udføres ved at åbne transom, kører hætten. Det anbefales at åbne vinduerne eller gå ud i frisk luft.

Under proceduren i rummet er det forbudt at komme ind. Udenstående kan bidrage til kontorets mikroflora og dermed til sputumet, patologiske formationer. Læger får analyse i en speciel maske (åndedrætsværn).

Sputumanalyse for tuberkuloseudskrift

Afkodning begynder med at se på udseendet af slim. Patologi karakteriserer ændringen i farve - det bliver mørkt, med synlige blodblandinger. Farve er ikke hovedindikatoren. Sputum bliver mørkt fra at drikke rødvin, kaffe passion. Nogle stoffer og farvede drikkevarer ændrer udseendet af slim.

Det indsamlede materiale er dechifreret af to indikatorer, det vil sige, læger får to resultater:

Positivt svar

Analyse af det resulterende sputum bekræfter tilstedeværelsen af ​​sygdommen i kroppen. Hvilket bekræfter dette:

  • fremmedlegemer eller ukendte indeslutninger;
  • tilstedeværelsen af ​​slimklumper
  • synlige striber
  • ubehagelig purulent eller smitsom lugt;
  • pus.

Makroskopisk forskningsmetode giver andre data:

  • fibrinøse svingninger;
  • Koch linseformationer
  • produkter fra nedbrydning af bakterielle stoffer;
  • rester af den patologiske proces i lungevæv.

Et positivt resultat afslører en øget mængde proteinforbindelser. Det når 100-120g / l.

En anden mikroskopisk metode gør det muligt at identificere andre farlige elementer:

  • alveolære makrofager;
  • overvurderet sammensætning af leukocytter
  • høj grad af lymfocytter.

For tuberkulose forsøger en person ofte at spytte ud af munden. Hemoptysis øger dannelsen af ​​røde blodlegemer. Mængden af ​​spyt i munden er sådan, at en person ikke kan sluge det uden at bemærke. Dens mere end i en sund tilstand.

Negativt svar

Undersøgelsen viser, at antallet af leukocytter er lille, svarer til normen. Mikrobakterier opdages heller ikke. Hvis patienten ikke føler sig sund, vil specialisten ordinere en yderligere undersøgelse. Det er muligt, at sygdommen er forbundet med lungesygdom. Typer og metoder til yderligere diagnostik afhænger af patientens symptomer og tilstand.

Hvordan er undersøgelsen af ​​slim

Tuberkulose er en farlig patologisk virkning på lungevæv, deres opløsning observeres. Analysen udføres ved flere metoder. Den mest almindelige - ELISA (immunoassay). Essensen af ​​metoden:

  1. Antistoffer tilsættes til opløsningen, i hvilken del af sputumet placeres.
  2. Kontroller koncentrationen af ​​antigener, sammenlignet med normen for en sund krop.
  3. Bestem aktiviteten af ​​det patologiske miljø.
  4. Diagnosticeret.

Den anden version af laboratorieundersøgelsen er affald. Til metoden tager specielt medicinsk udstyr. Essensen af ​​hardware forskning:

  1. I sputum injiceret mikro miljø for den tilsigtede type infektion.
  2. Apparatet begynder at vokse ved en bestemt temperaturstamme af bakterier.
  3. Kuldioxid produceres i processen, og sensorer henter det op.
  4. Gassen kombineres med farvestoffet.
  5. På fluorescensindekset får man konklusioner om typen af ​​sygdom.

Den nemmeste måde er kulturel. Phlegm sået i et særligt miljø. Lægen undersøger typer af kolonier af mikrobielle formationer. Metoden er den længste, men giver dig mulighed for at bevise diagnosen. Det bruges meget sjældent, netop på grund af lang tid, hvilket ikke altid er passende for patienten.

Analyse af sputum PCR til tuberkulose

PCR er en forkortelse af den medicinske terminologi polymerasekædereaktion. Diagnostik er en af ​​de seneste udviklinger af forskere. Det blev åbnet i 1983, hvor vigtigheden af ​​opdagelsen er værdsat i verden, fik forskeren den højeste anerkendelse - Nobelprisen.

Metoden er baseret på brug af genteknologi. Dens alsidighed i behovet for en lille mængde materiale til en præcis diagnose. Identificere infektion med tuberkulose er virkelig i de tidlige infektionsdage uden at vente på udviklingen af ​​sygdommen.

Essensen af ​​metoden, der er polymerase:

  • en patient tager et fragment af DNA-partikler;
  • udføre biologisk syntese af materialet
  • bestemt af klassen af ​​mikroorganismer.

Processen er teknisk kompleks, det involverer molekylærgenetisk undersøgelse. PCR for tuberkulose tager bogstaveligt talt et par timer. Den tid, der kræves for andre metoder, kan ikke sammenlignes med ham i hastighed. Efter at have passeret analysen venter patienten på detektionsmiddelets påvisning. Processen, der ligger til grund for en specialist, kan forstå. En almindelig person forstår ikke indviklingen i metoden.

Hvordan er diagnosen af ​​tuberkulose test:

  1. Tag det nødvendige materiale til analyse. Hvad kunne det være: blod, mave, sputum, vand, vasket med bronkier.
  2. Materialetypen er valgt afhængigt af typen af ​​patogen mulig infektion.
  3. Det næste skridt er at studere kædeforbindelsen. To kæder udsættes for høje temperaturer op til 98 grader. Stadiet hedder denaturering (destruktion af strukturelle DNA-kæden). Temperatur eksponeringstid - op til 2 minutter.
  4. Næste fase er annealing. Temperaturen er reduceret, primeren får lov til at forbinde til DNA-strengen.
  5. Som følge heraf opstår forlængelse - syntesen af ​​molekyler, der er nødvendige for processen.

Til en sådan analyse kræves der særligt udstyr. Det er dyrt, så det er ikke tilgængeligt på nogen sundhedsanlæg. PCR udføres i vanskelige tilfælde, når der ikke er noget eksakt resultat af konventionelle diagnostiske metoder, er det umuligt at udføre instrumentelle metoder til kontrol af patientens tilstand.

Fordelene ved PCR-teknologi:

  1. Hastigheden for at få resultatet. Ca. 5 timer har en læge nøjagtige data. Denne hastighed giver dig mulighed for at hjælpe patienten i en nødsituation. Oftere er det den præoperative periode.
  2. Tilladt, når andre metoder ikke kan bruges. For eksempel fører den hyppige gentagelse af røntgenstråler til stråling. PCR er ikke farlig for patienten.
  3. Du kan undersøge ethvert biologisk miljø. Selv komplekse former for tuberkulose er identificeret.
  4. Metoden er derfor sikker til børn.
  5. Infektion opdages på ethvert tidspunkt.
  6. PCR tillader ikke at skjule selv et lille antal bakterielle mikroformationer.
  7. Velegnet til kontrol af mulig gentagelse af tuberkulose.

Hvor meget sputumanalyse for tuberkulose

Prøver tages mere end én gang. Gentagelser udelukker muligheden for fejl eller opnåelse af materiale af ringe kvalitet, der ikke afspejler patientens sande stilling og tilstand. Hvor mange gange at samle sputum, fortælle den behandlende læge. Den bedste mulighed er tre gange om dagen. Nogle gange kan der kræves yderligere prøver. Under hvilke tidspunkter samler de:

  1. Før du spiser om morgenen.
  2. 3-4 timer efter den første test.
  3. På den anden dag, også før måltider.

Tuberkulose er en farlig sygdom, som kan påvirke en persons legeme. Der er mange infektionssituationer. Med nogen mistanke om muligheden for infektion, vent ikke på lyse symptomer. Det bør testes, undersøges og i tide for at påbegynde behandlingen.

PCR diagnose af tuberkulose hos børn og voksne: indikationer for

Verdenssundhedsorganisationen anerkendte for 20 år siden, at udbredelsen af ​​tuberkulose var ude af kontrol og nåede omfanget af en epidemi. Siden da har situationen ikke forbedret sig. Mere end en million tilfælde af sygdommen diagnosticeres hvert år, hvoraf næsten en fjerdedel er dødelig. I løbet af det sidste årti er forekomsten blandt børn steget, de fleste former for sygdommen lænner ikke til standard antibiotikabehandling.

I dag er en af ​​de globale opgaver for medicin udviklingen af ​​sådanne diagnostiske metoder, som vil gøre det muligt at identificere patologi inden begyndelsen af ​​udprøvede kliniske symptomer. En af dem er polymerasekædereaktionen (PCR) til tuberkulose, som hjælper med at opdage Koch-sygdomsfremkaldende pinde i blod, sputum og andre biologiske væsker.

Diagnose af tuberkulose

Screeningstest er rettet mod at opdage patienter, bærere af tuberkulose og forebygge spredning af infektion i samfundet. For børn under 14 år er Mantoux testen massivt brugt. Dette er en immunologisk test, hvor en dosis tuberkulin injiceres subkutant - en kompleks blanding af det genetiske materiale af flere typer mycobakterier. Udseendet af en udtalt reaktion indikerer en aktivt forekommende infektiøs proces.

Til forebyggende undersøgelse hos voksne ved hjælp af fluorografi eller røntgenstråler. Disse metoder hjælper med at visualisere patologiske læsioner i lungevæv. Det forårsager imidlertid vanskeligheder med at differentiere tuberkulose fra en anden organisk patologi (maligne og godartede neoplasmer, inflammatoriske processer, parasitære invasioner, professionel lungeskader).

For at præcisere strukturen og størrelsen af ​​det patologiske fokus kan der være behov for yderligere instrumentelle undersøgelser:

  • målrettet radiografi;
  • computertomografi;
  • magnetisk resonans billeddannelse.

Metoder til diagnose af tuberkulose

I tilfælde af tvivlsomme resultater og til udnævnelsen af ​​passende terapi er der behov for mere nøjagtige diagnostiske metoder, som gør det muligt at isolere patogenet. Mikroskopisk og bakteriologisk undersøgelse af sputum bruges til at bekræfte lungerformer af tuberkulose i lang tid.

I de seneste år er forekomsten af ​​mycobacterium i forskellige organer og systemer - nyrerne, knoglerne, tarmene, huden - blevet hyppigere. For at identificere disse former for tuberkulose kan ultralydundersøgelser, urin og fæceskultur, endoskopiske undersøgelser anvendes.

PCR-diagnostik til tuberkulose hjælper med at bekræfte tilstedeværelsen af ​​Koch-pinde i blodet samt dens følsomhed overfor visse lægemidler. Dette er en meget effektiv metode baseret på påvisning af det bakterielle genetiske materiale i forskellige biologiske væsker.

Specificitet og indikationer

Polymerasekædereaktion er en yderst følsom mikrobiologisk diagnostisk metode, der er baseret på genteknologiske principper. For at bekræfte tilstedeværelsen af ​​et patogen i et biologisk materiale er det tilstrækkeligt at detektere et unikt nukleinsyrefragment for det. PCR for tuberkulose kan detektere bakterier i blodet, sputum, urin.

I øjeblikket udviklede flere analysemetoder. De mest populære blandt dem er følgende:

  • Real-time PCR;
  • mikrofluidisk teknologi;
  • sekventering og pyrosequencing.

Real-time PCR

Laboratorier bruger oftest realtids-polymerasekædereaktion, da det reducerer antallet af falsk-positive resultater, og analyseprocessen selv tager kort tid.

I betragtning af det store antal skjulte former for sygdommen og ineffektiviteten af ​​standarddiagnostiske metoder anvendes PCR i stigende grad. Formålet med denne analyse er vist på:

  • identificere mistænkelige områder på røntgenstrålen;
  • tvivlsomme resultater af tuberkulinprøve
  • umuligheden af ​​at foretage mikroskopisk og bakteriologisk analyse af sputum hos personer i alvorlig tilstand
  • udføre kirurgiske indgreb, når det er nødvendigt at hurtigt sikre, at der ikke er nogen infektion;
  • afvisning af brugen af ​​fluorografi, røntgenstråler eller computertomografi (fx ved gravide kvinder og amning i tilfælde af overskydende strålingseksponering)
  • mistanke om ekstrapulmonal tuberkulose (det anbefales at ikke kun blod, men også slim anvendes).

PCR-diagnostik af tuberkulose har vist sig i undersøgelsen af ​​børn på grund af manglende yderligere eksponering og hurtige resultater.

Forberedelses- og analyseprocedure

Særligt forberedelse til blod-PCR er ikke påkrævet. For at undgå komplikationer ved blodprøveudtagning og for at opnå materiale af høj kvalitet skal følgende generelle regler følges:

  • analyse skal tages om morgenen ikke tidligere end 2 timer efter at være vågnet
  • Det bør begrænse indtaget af fede og stegte fødevarer en dag før blodprøveudtagning;
  • Afstå fra at spise, te og kaffe i 8-9 timer, det er tilladt at drikke rent vand
  • Røg ikke i mindst 3-4 timer.

I tilfælde af permanent medicin (hormoner, antikoagulantia, antiinflammatoriske lægemidler, antibiotika, blodfortyndere), bør du underrette laboratorieassistenten om dette.

Ved levering af sputum bør du børste dine tænder godt og skylle munden flere gange. Saml materiale i en steril beholder. For bedre resultater kan der tages en slim eller mucolytisk middel om aftenen.

Diagnosen selv består af flere trin.

    Hegn materiale. Det kan udføres i laboratoriet og eksternt. Nogle typer af materiale patienten indsamler uafhængigt (urin, slim).

Destruktionen af ​​strukturen af ​​nukleinsyrer (denaturering af DNA og RNA molekyler). For at gøre dette opvarmes testmaterialet til en temperatur på 98 grader og holdes i flere minutter. Som følge heraf dannes den dobbelte helix, enkeltstrengede molekyler.

  • Joke. Efter tilsætning af en primer (en kort del af nukleinsyre), falder temperaturen med flere grader, polymerase aktiveres.
  • Elognatsiya. Temperaturen bringes til det optimale niveau, enzymaktiviteten når et maksimum, og den anden kæde er afsluttet i overensstemmelse med Chargaff-komplementaritetsreglen.
  • For at afslutte undersøgelsen er det nødvendigt at syntetisere det krævede antal DNA-molekyler - ca. 50 cyklusser af den ovennævnte reaktion. Det tager ca. 2-3 timer. Et positivt resultat af reaktionen indikerer ikke altid det aktive stadium af sygdommen, men er en indikator for tilstedeværelsen af ​​en mikroorganisme i kroppen.

    Fordele og ulemper ved fremgangsmåden

    I sammenligning med andre mikrobiologiske metoder tager PCR ikke lang tid at opdage Mycobacterium tuberculosis ved hjælp af PCR, resultatet kan opnås på testdagen.

    En anden fordel er analysens høje specificitet, som gør det muligt at påvise patogenens tilstedeværelse med en nøjagtighed på 90-95% i næsten ethvert biomateriale (blod, urin, afføring, cerebrospinalvæske, sputum, bronchusspyling).

    Der er imidlertid flere ulemper med metoden:

    • en temmelig høj procentdel falske positive resultater (op til 15%), der er forbundet med påvisning af ikke-levende mikroorganismer;
    • i nogle tilfælde kan du springe over sygdommens kendsgerning, da Mycobacterium tuberculosis ofte udsættes for mutationer, og dets genetiske materiale ændres;
    • lav effektivitet ved undersøgelse af personer med immundefekt
    • høje omkostninger ved forskning, behovet for dyrt udstyr og reagenser.

    Hvad kan erstattes?

    I betragtning af de forskellige former for tuberkuloseinfektion, for en mere præcis diagnose og valg af behandling er det nødvendigt at kombinere flere diagnostiske undersøgelser:

      Obligatorisk analyse for børn er Mantoux testen. Hvis indførelsen af ​​tuberkulin (genetisk materiale af mycobakterier) forekommer en udtalt reaktion, kan det antages infektion med en tuberkelbacillus.

    Røntgenmetoder kan bruges til at visualisere det patologiske fokus. Ved diagnosen ekstrapulmonal tuberkulose anvendes endoskopiske metoder med samtidig biopsi:

    • bronkoskopi hjælper med at identificere læsioner i strubehovedet, luftrøret, bronchi;
    • koloskopi - tarm;
    • cystourethroskopi - organer i urinsystemet
    • hysteroskopi - kvindelige kønsorganer. Disse metoder er ikke specifikke, for at foretage en nøjagtig diagnose bør patogenet identificeres.

    Generelle kliniske tests vil bidrage til mere specifikt at bestemme kroppens tilstand. En fuldstændig blodtælling med leukocytformel er påkrævet.

    En stigning i antallet af neutrofiler med reduceret lymfocytniveau og en stigning i erythrocytsedimenteringshastigheden (ESR) indikerer en aktiv inflammatorisk proces med bakteriel etiologi. At udelukke skade på organerne i urinsystemet ved hjælp af en generel urinalyse og kultur for sterilitet.

    PCR er i øjeblikket tilgængelig i de fleste private laboratorier. Dette kræver ikke kun højt kvalificerede specialister, men også dyrt udstyr, et stort antal reagenser. Derfor er brugen af ​​denne metode begrænset på trods af dens høje nøjagtighed og specificitet.

    Fordele og ulemper ved PCR (a) til diagnose af tuberkulose

    En specifik tuberkuloseinfektion har været til stede i humane væv og strukturer i mange år, og under visse omstændigheder spredes det hurtigt i kroppen om 2-3 måneder. Nogle gange er det bedste kursusforløb meget vanskeligt at vælge på grund af patogenens sene diagnose og tilpasning til mange lægemidler.

    Den seneste PCR-diagnose af tuberkulose hjælper med at detektere ikke kun den udviklede sygdom, men også selve patogenet, når de første tegn på sygdommen endnu ikke er kommet frem.

    Hvad er PCR?

    Diagnose af tuberkulose ved PCR har vist sig for nylig. I 1983 opfandt en mikrobiolog fra Amerika, Cary Mullis, en procedure, hvormed mikroorganismer kunne rekonstrueres fra biologisk materiale i et kort segment. Dette arbejde har tjent Nobelprisen.

    PCR for tuberkulose er en polymerkædeproces, hvor diagnose og påvisning af virale patogener ved genteknologi. Teknikken anvendes i immunologiske, mikrobiologiske, virologiske og biokemiske laboratorier.

    Den universelle metode hjælper læger til at diagnosticere og identificere en smitsom proces, selv efter de første timer med infektion, længe før symptomernes begyndelse. Forskning er mulig selv med en lille mængde biomateriale.

    Hvad er der behov for analyse?

    • Flere segmenter af DNA (primere), med hvilke biologisk syntese begynder;
    • Nukleotidforbindelser, grundlaget for DNA-molekylet eller RNA;
    • Et polymeraseenzym, der accelererer PCR-analyse.

    Hvad er grundlaget for metoden?

    For det første ekstraheres et segment af DNA fra et biomateriale fra en inficeret person ved anvendelse af genmolekylære biosyntesemetoder, hvilken type mikroorganismer, hvortil biofragmentet hører, bestemmes yderligere.

    Denne komplekse reaktion tager mindre tid end nogle biometoder. PCR bestemmer patogenet om nogle få timer, mens der ikke er behov for at isolere det fra en biologisk væske (sputum, cerebrospinal eller blodmedium), er det ikke nødvendigt at dyrke det i lang tid på et næringsmedium. Det er nok, at det studerede materiale indeholder en DNA-streng af et infektiøst patogen.

    Når man gennemfører en PCR-blodprøve for tuberkulose in vitro, fremstilles syntesen af ​​ribonukleinsyrer af mycobacterium tuberculosis kunstigt.

    Diagnostiske trin

    Molekylær reaktion ved PCR er en simpel procedure, der tager lidt tid. Det krævede biomateriale tages: blod, sputum, bronkialvaskvæske bruges til at bestemme tbc.

    1. For det første ødelægges den primære form for DNA, 2 kæder adskilles ved høj temperatur (maks. 98 ° C i højst 2 minutter);
    2. Så udglødning udføres, den primære temperatur reduceres med flere divisioner, DNA-strengen er bundet til primeren;
    3. Den næste fase kaldes forlængelse med biosyntesen af ​​de nødvendige molekylære strukturer.

    For at opnå det krævede antal kopier af DNA skal fra 25 til 30 sådanne cykler passere, og det resulterende antal mycobakterier kan let genkendes.

    Er det nødvendigt at gøre PCR til tuberkulose?

    Direkte til alle patienter med mistænkt TVC, er kædediagnostik ikke færdig, da proceduren kræver brug af dyrt udstyr. Ikke alle medicinske statsinstitutioner tillader det at blive købt, især da de sædvanlige metoder til diagnosticering af mycobacterium tuberkulose også er informative.

    • Omhyggelig historie tager spørgsmålet om patienten;
    • Ekstern undersøgelse
    • Mantoux tuberculin test;
    • Radiografisk eller fluorografisk undersøgelse
    • Om nødvendigt, computer diagnostik;
    • Mikroskopisk eller bakteriologisk undersøgelse af masken med sputum.

    PCR for tuberkulose udføres kun, når det ikke er muligt at udføre en anden instrumentanalyse eller under vanskelige forhold at diagnosticere.

    På trods af at mange diagnostiske metoder er opfundet, fortsætter antallet af patienter med tuberkulose at vokse. Derudover har forekomsten fået nogle egenskaber: En alvorlig form for sygdommen observeres ofte, antallet af dødsfald stiger, patogenet bliver resistent over for eksisterende kemoterapeutiske lægemidler.

    Mange mennesker vil ikke gennemgå en rutinemæssig inspektion hvert år, nægte vaccination, hvilket fører til en stigning i forekomsten. Sådanne omstændigheder kræver effektive og informative forskningsmetoder til rådighed for voksne og børn diagnosticeret med tbc. PCR har fordele i forhold til andre diagnostiske metoder.

    Hvad er værdien af ​​metoden?

    Denne seneste forskning har vist sig godt. Hvis det af en række grunde er vanskeligt at foretage en diagnose, eller i nogle kontroversielle tilfælde registrerer PCR tuberkelbacillus lettere i biologisk materiale end andre metoder.

    • Denne hurtige undersøgelse, et lille segment af molekylet, gør det muligt at foretage en nøjagtig diagnose på kort tid om cirka 5 timer. Dette anvendes til nødsituationer, fx før en akut operation.
    • En blodprøve for tuberkulose er mulig, når andre metoder ikke er tilgængelige eller kontraindiceret - nogle gange til påvisning af tbc patogenet skal mange Rg-skud tages, strålingsdosis er for stor;
    • Ved anvendelse af polymerasereaktionen kan eventuelle biologiske væsker undersøges for tilstedeværelsen af ​​mykobakterier. For eksempel kan du gennemføre en undersøgelse af cerebrospinalvæske med tuberkuløs meningitis eller urin med urogenitalt tuberkulose;
    • Metoden er sikker, diagnosen tuberkulose hos børn, der bruger PCR, forårsager ikke vanskeligheder;
    • Metoden til polymerreaktion afslører en tuberkelbacillus i enhver form og stadie af sygdommen;
    • Tilstedeværelsen af ​​kun få bakterier i biomaterialet giver dig mulighed for at se tilstedeværelsen af ​​mikroorganismer, da dette er en følsom reaktion;
    • PCR diagnostiserer nemt sygdommens gentagelse.

    På trods af det store antal fordele er alle patienter med mistanke om tbc-undersøgelse ikke færdige, da der også er ulemper, tages de også i betragtning.

    video

    Video - tidlig diagnose

    Hvad er ulemperne?

    Denne diagnosemetode er ret usædvanlig end naturlig, for der er grunde. Først og fremmest tages højde for metoden. Udstyret er dyrt, offentlige klinikker har ikke mulighed for at købe det på grund af den høje pris, men de fleste af de betalte laboratorier har udstyret, de analyseres.

    • Metoden registrerer døde bakterier, der er døde efter behandling, mens PCR viser et positivt resultat. Umiddelbart efter kemoterapi giver det ingen mening at foretage en undersøgelse, da resultatet vil være upåliteligt;
    • Mycobacterium tuberculosis mutationer er modtagelige, hvilket fører til ineffektivitet af metoden, og DNA-strengen kan ikke syntetiseres konsekvent.

    Miljøet for undersøgelsen bør vælges omhyggeligt; blod eller urin kan kun indsamles, hvis der er mistanke om infektion. Sputum bør ikke tages til undersøgelse, hvis der er mistanke om knogle tuberkulose. I denne situation vil diagnosen være forkert.

    Blod og urin hos en patient med tuberkulose, der skal studeres på PCR, tages sjældent, identifikationen af ​​sygdommen på denne måde er tvivlsom. I disse biologiske medier bestemmes patogenet kun i sepsis eller i tilfælde af dissemineret tuberkulose. Lokale former er mest almindelige, med deres blod og urin kan forblive uændrede. Ofte er slim taget til undersøgelse.

    Hvem viser analysen?

    De fleste patienter sendes til PCR diagnose i kontroversielle og vanskelige tilfælde af tuberkulose. Hvornår udsender lægepersonale henvisninger til forskning?

    1. Hvis der er kontakt med en person, der har været pålideligt diagnosticeret med tuberkulose, men det er vanskeligt at diagnosticere ved hjælp af konventionelle metoder.
    2. Under disse omstændigheder, hvis patienten til at give klinikken er umulig for radiografi eller anden forskning. I en sådan situation er det lettere at inspicere det ved hjælp af polymermetoden. Sputumanalyse leveres simpelthen til laboratoriet i en speciel beholder, og resultatet bliver kendt efter et par timer;
    3. Før operationen er det absolut nødvendigt at afgøre, om patienten er syg med tuberkulose, i hvilket tilfælde PCR er angivet;
    4. På grund af metodens sikkerhed er det muligt at foretage en undersøgelse af en gravid kvinde eller et barn uden at skabe en ekstra røntgenbelastning;
    5. Tvivlsomme Mantoux testresultater.

    Enhver, der ønsker, kan undersøges mod et gebyr, hvis tuberkulose ikke er blevet bekræftet ved hjælp af bakteriologi og fluoroskopi. Dette sker, hvis læsionen i lungevævet er usynlig i Rg-billedet i en direkte fremspring, og patienten er ude af stand til at samle sputum korrekt, men tegn på humant tuberkulose forstyrres.

    Moderne PCR reaktion til diagnose er nøglen til vellykket behandling, som følge af, at sygdommens udbredelse falder. Traditionelle metoder til identifikation af lidelser producerer ikke altid den ønskede virkning.

    Således har PCR-analyse hidtil været en af ​​de pålidelige og sikre diagnosemetoder i de tidlige stadier af sygdommen.